2.2.3.1 Grundprinzip dieser enzymatischen Methode
Die Biochemie bedient sich zur Bestimmung der Glucosekonzentration im
wesentlichen enzymatischer Methoden. Eine Möglichkeit bietet das
Enzym
Glucose-Oxidase (GOD). Es oxidiert die Glucose unter Sauerstoffaufnahme
zur Gluconsäure, während der Sauerstoff des Wassermoleküls
zum einwerti-
gen Sauerstoff im Wasserstoffperoxid reduziert wird.
GOD
Glucose + H2O + O2 -----------> Gluconsäure
+ H2O2
Über eine iodometrische Reaktion kann H2O2
mit Hilfe des Katalysators
Wolframation (WO42-) bestimmt werden: während
H2O2 reduziert wird,
werden Iodid-Ionen zu molekularem Iod oxidiert, das zur ursprünglichen
Glucose in stöchiometrischer Menge vorliegt:
WO42-
H2O2 + 2 I- ----------> I2
+ 2 OH-
2.2.3.2 Durchführung
Bevor die Messung beginnt, wird eine GOD-Reaktionslösung hergestellt,
in der 6 mmol KI, 1,5 mmol Na2WO4 und ungefähr
10 U GOD in 100 ml
Phosphatpuffer gelöst sind. Der Puffer (Konzentration cP=0,1
mol/l) wird
auf pH 7 eingestellt, da sich in diesem Bereich das pH-Optimum der
Glucoseoxidase befindet. (1 Enzymeinheit U gibt die Enzymmenge an,
die unter Standardbedingungen die Umsetzung von 1 micromol Substrat
je Minute katalysiert.)
Von einer Glucosestandardlösung (Co=1,11 mmol/l) wird analog den
bisherigen Bestimmungen eine Verdünnungsreihe mit den Glucosekon-
zentrationen 0,2 Co; 0,4 Co; 0,6 Co; 0,8 Co; Co aufgestellt.
0,1 ml dieser Zuckerlösungen werden mit 2,0 ml der GOD-Reaktions-
lösung gut vermischt und nach 30 Minuten wird die jeweilige Extinktion
gegen Wasser im Photometer bei einer Wellenlängen von 366 nm gemessen.
2.2.3.3 Ergebnisse
Aus den gemessenen Extinktionswerten ergibt sich annähernd eine
Proportionalität zur Glucosekonzentration.